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血清储存和解冻
将血清从冷冻箱取出后,先置于2~8℃冰箱使之融解,然后在室温下使之全融。但必须注意的是,融解过程中必须规则地摇晃均匀。长时间储存在2-8℃时,血清中的各种蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纤维蛋白原、玻粘连蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可见的混浊。因此,推荐在-20℃以下储存血清,并避免反复冻融。我们建议血清应保存在-2O℃。若存放于4℃时,请勿超过一个月。若一次无法用完一瓶,建议无菌分装血清至恰当的灭菌容器内(由于血清结冻时体积会增加约10%,必须预留此膨胀体积之空间,否则易发生污染或容器冻裂之情形),再放回冷冻。
避免血清产生沉淀
按如下操作可避免沉淀的产生:
(1)解冻血清时,请随时将之摇晃均匀,使温度及成分均一,减少沉淀的发生。
(2) 血清分装冻存时,须规则摇晃均匀(小心勿造成气泡),使温度与成分均一。
(3) 勿直接由-20℃直接至37℃解冻,因温度改变太大,容易造成蛋白质凝结而发生沉淀。
(4) 勿将血清置于37℃太久,否则血清会变得浑浊,同时血清中许多较不稳定的成份也会因此受到破坏,从而影响血清的品质。
(5) 血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以无须做此步骤。
(6) 若必须做血清的热灭活,请遵守56℃,30分钟的原则,并且随时摇晃均匀。温度过高,时间过久或摇晃不均匀,都会造成沉淀物的增多。
若溶解后血清有少许沉淀,不要紧张,不会影响血清质量,也不会影响细胞的培养状态,如何避免这些沉淀呢,我们总结了一下血清沉淀融化“三步曲”:
第一步:室温90min或者15-20°C水浴18min。
第二步:20°C水浴25min。
第三步:37°C水浴35min。
如果内有头皮屑絮状沉淀,说明脂蛋白和纤连蛋白析出,不会影响细胞培养状态。